分 離 純 化

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含有一種以上的微生物培養物稱(chēng)為混和培養物（mixed culture）。如果在一個(gè)菌落中所有細胞均來(lái)自于一個(gè)親代細胞，那么這個(gè)菌落稱(chēng)為純培養（pureculture）。在進(jìn)行菌種鑒定時(shí)，所用的微生物一般均要求為純的培養物。得到純培養的過(guò)程稱(chēng)為分離純化，方法有許多種。

１、傾注平板法

首先把微生物懸液通過(guò)一系列稀釋?zhuān)∫欢康南♂屢号c熔化好的保持在40-50°左右的營(yíng)養瓊脂培養基充分混合，然后把這混合液傾注到無(wú)菌的培養皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養。單一細胞經(jīng)過(guò)多次增殖后形成一個(gè)菌落，取單個(gè)菌落制成懸液，重復上述步驟數次，便可得到純培養物。

２、涂布平板法

首先把微生物懸液通過(guò)適當的稀釋?zhuān)∫欢康南♂屢悍旁跓o(wú)菌的已經(jīng)凝固的營(yíng)養瓊脂平板上，然后用無(wú)菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養基表面上，經(jīng)恒溫培養便可以得到單個(gè)菌落。

３、平板劃線(xiàn)法

簡(jiǎn)單的分離微生物的方法是平板劃線(xiàn)法。用無(wú)菌的接種環(huán)取培養物少許在平板上進(jìn)行劃線(xiàn)。劃線(xiàn)的方法很多，常見(jiàn)的比較容易出現單個(gè)菌落的劃線(xiàn)方法有斜線(xiàn)法、曲線(xiàn)法、方格法、放射法、四格法等。當接種環(huán)在培養基表面上往后移動(dòng)時(shí)，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋?zhuān)詈笤谒鶆澋木€(xiàn)上分散著(zhù)單個(gè)細胞，經(jīng)培養，每一個(gè)細胞長(cháng)成一個(gè)菌落。

４、富集培養法

富集培養法的方法和原理非常簡(jiǎn)單。我們可以創(chuàng )造一些條件只讓所需的微生物生長(cháng)，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競爭，在生長(cháng)能力方面遠遠超過(guò)其他微生物。如果要分離一些專(zhuān)性寄生菌，就必須把樣品接種到相應敏感宿主細胞群體中，使其大量生長(cháng)。通過(guò)多次重復移種便可以得到純的寄生菌。

５、厭氧法

在實(shí)驗室中，為了分離某些厭氧菌，可以利用裝有原培養基的試管作為培養容器，把這支試管放在沸水浴中加熱數分鐘，以便逐出培養基中的溶解氧。然后快速冷卻，并進(jìn)行接種。接種后，加入無(wú)菌的石蠟于培養基表面，使培養基與空氣隔絕。另一種方法是，在接種后，利用N2或CO2取代培養基中的氣體，然后在火焰上把試管口密封。有時(shí)為了更有效地分離某些厭氧菌，可以把所分離的樣品接種于培養基上，然后再把培養皿放在*密封的厭氧培養裝置中。

6、單細胞（或單孢子）分離法

是采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細胞或單個(gè)個(gè)體進(jìn)行培養以獲得純培養。較大的微生物，可采用毛細管提取單個(gè)個(gè)體。個(gè)體相對較小的微生物，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下用毛細管或顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個(gè)微生物細胞或孢子以獲得純培養。單細胞分離法對操作技術(shù)有比較高的要求。

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